Що таке клонування у вектор?
А
є невеликий фрагмент ДНК, який можна стабільно підтримувати в організмі, і в який можна вставити чужорідний фрагмент ДНК для цілей клонування. Вектором для клонування може бути ДНК, взята з вірусу, клітини вищого організму, або це може бути плазміда бактерії.
Вектори клонування є крихітні геноми, в які можна ввести чужорідну ДНК і передати її клітині-господарю для використання в клонуванні. Прикладами є плазміди, бактеріофаги та косміди. Вектор — це молекула ДНК, яка переносить чужорідну молекулу ДНК у клітину-хазяїна. Він самовідтворюється і може інтегруватися в клітину-хазяїна.
Загалом, клонуючі вектори є плазміди, які використовуються переважно для розмноження ДНК. Вони реплікуються в E. coli з великою кількістю копій і містять сайт множинного клонування (також званий полілінкером) із сайтами рестрикції, які використовуються для вставки фрагмента ДНК.
Протокол спрямованого мутагенезу
- Крок 1: Процес мутагенезу та дизайн грунтовки. Створіть пару праймерів, що включають бажану мутацію в 5'-кінець одного з них. …
- Крок 2: ПЛР. …
- Крок 3: Очистіть продукт ПЛР. …
- Крок 4: Фосфорилюйте 5'-кінці. …
- Крок 5: лігувати кінці ДНК. …
- Крок 6: Перетворення на компетентного Е.
Вектори клонування використовуються для вставити чужорідну ДНК в іншу клітину та створити кілька її копій. Чужорідна ДНК дублюється та експресується за допомогою механізму клітини-господаря. Він ампліфікує одну копію ДНК у кілька копій.
Для клонування доступні різні типи векторів плазміди, бактеріофаги, бактеріальні штучні хромосоми (BAC), дріжджові штучні хромосоми (YAC) і штучні хромосоми ссавців (MAC).