Яка формула фосфорамідиту?
Фосфорамідити, похідні фосфористої кислоти H3PO3, є сполуками тривалентного фосфору, що містять два зв’язки PO і один PN.
Фосфорамідити є модифіковані нуклеозиди і є стандартною хімічною речовиною, яка використовується в сучасному синтезі ДНК. Ці молекули дозволяють послідовне додавання нових основ до ланцюга ДНК у надзвичайно простій і надзвичайно ефективній циклічній реакції.
Олігонуклеотидний синтез Фосфорамідитний метод
- Етап 1 (детритилювання) Цикл ініціюється видаленням захисної групи 5'-DMT (4,4'-диметокситритил) нуклеозиду, пов'язаного з твердою опорою (містить кінцеву 3' основу олігонуклеотиду). …
- Крок 2 (з'єднання) …
- Крок 3 (окислення) …
- Крок 4 (Закривання)
Концентрація ДНК оцінюється шляхом вимірювання абсорбції при 260 нм, коригування вимірювання A260 для каламутності (виміряної абсорбцією при 320 нм), множення на коефіцієнт розведення та використання співвідношення, яке A260 1,0 = 50 мкг/мл чистої дцДНК.
Більшість нуклеозидфосфорамідитів розчинні в ацетонітрил, який є звичайним розчинником для синтезу ДНК. Однак більш ліпофільні амідити, такі як амідити жирних кислот, потребують дихлорметану.
Гостра та короткочасна токсичність У дослідженнях із залученням моделі кроликів було виявлено, що фосфорамідити ДНК мають певний потенціал подразнення очей. Проте потенціал подразнення шкіри не спостерігався.