Що таке QuikChange PCR?
PCR Quick Change або сайт-спрямований мутагенез використовується для зміни основ ДНК на цікаву послідовність (максимум 5 основ). Найважливішим кроком у цьому експерименті є розробка праймерів.
QuikChange™ працює за допомогою пари комплементарних праймерів з мутацією. У раунді циклів ПЛР ці праймери з’єднуються з матричною ДНК, реплікуючи плазмідну ДНК з мутацією. Продукт мутантної ДНК має розрив ланцюга (Рис. 1A).
Система QuikChange II є другим поколінням методу QuikChange компанії Agilent. Він забезпечує кращу точність порівняно з оригінальним набором, зберігаючи ефективність мутації понад 80% для мутагенезу в одному місці. Набір містить PfuUltra High-Fidelity ДНК-полімеразу для мінімізації небажаних помилок.
Підсумовуючи, RT-PCR і qPCR є передовими методами ПЛР або полімеразної ланцюгової реакції. qPCR дає швидші та детальніші результати в реальному часі та використовується для кількісного визначення нуклеїнових кислот. RT-PCR використовується для виявлення та ампліфікації кДНК. Досліджуйте всі важливі теми, узгоджені з оновленою навчальною програмою NEET, лише на BYJU'S.
Для абсолютного кількісного визначення за допомогою ПЛР у реальному часі потрібні стандартні криві та еталонні зразки, але цифрова ПЛР дозволяє кількісно визначити зразки без використання стандартної кривої. У цьому прикладі з використанням ПЛР у реальному часі зверніть увагу, скільки лунок потрібно для створення стандартної кривої.
Набір для сайт-спрямованого мутагенезу QuikChange використовується для створення точкових мутацій, перемикання амінокислот і видалення або вставки однієї чи кількох амінокислот. Метод сайт-спрямованого мутагенезу QuikChange виконується за допомогою ДНК-полімерази PfuTurbo та термоциклера.